RESUMO

Muitas comunidades da região metropolitana de Curitiba sofrem com a falta de saneamento básico, baixa renda familiar e vivem em condições precárias de higiene, estando predispostas a doenças parasitárias. O presente projeto tem por objetivo pesquisar cistos de Giardia duodenalis em pessoas e animais de uma mesma família para avaliar o potencial zoonótico do parasito. Até o momento, 57 amostras fecais de pessoas e 24 amostras de seus animais domésticos foram analisadas por técnicas coproparasitológicas de centrifugo-flutuação e sedimentação espontânea. Os exames revelaram 14 amostras positivas para cistos do parasito Giardia, 12 de pessoas e duas de cão. Tanto a técnica de sedimentação espontânea, que é utilizada como rotina por laboratórios, como a de centrifugo-flutuação, possuem sensibilidade e especificidade inferior às técnicas de biologia molecular, portanto, suspeita-se que o número real de amostras positivas seja maior. Além disso, uma linhagem de potencial zoonótico pode estar presente entre os indivíduos infectados. A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica mais sensível e específica, mas para realizá-la há necessidade de isolar e rupturar o cisto de Giardia antes de proceder com a extração de DNA. Para isso, o presente trabalho também objetivou adequar o isolamento e o rompimento dos cistos de Giardia para obter amostras de DNA para a PCR. Para a ruptura dos cistos, foram utilizadas amostras controle de Giardia. Os cistos controle foram submetidos a 1, 2, 3 e 4 ciclos de 2 minutos de ultrassom e a eficiência da ruptura avaliada por meio da contagem dos cistos antes e após cada ciclo. Após o primeiro ciclo de ultrassom foi possível detectar a quebra de aproximadamente 40% dos cistos das amostras, após o segundo ciclo, aproximadamente 20% dos cistos ainda não haviam sido rompidos e após o terceiro ciclo a ruptura foi de 90%. Após o quarto ciclo de sonicação, não foi possível detectar cistos. O DNA foi extraído imediatamente após o quarto ciclo de ultrassom, por técnica utilizando fenol-clorofórmio após digestão com proteinase K, e armazenado a -20°C. Destes resultados, pode-se concluir que tanto pessoas quanto cães habitando a mesma área podem ser encontrados infectados por Giardia na região metropolitana de Curitiba. Por meio da PCR, pretende-se determinar a linhagem dos isolados para avaliar o potencial zoonótico. Se uma linhagem zoonótica de Giardia duodenalis for encontrada a comunidade será alertada para que medidas de controle sejam tomadas.

Palavras-chave: Giardia duodenalis, Linhagem, Cão