RESUMO

Rhizobium sp. NGR234 é uma ?-proteobacteria que tem a capacidade de estabelecer uma relação simbiótica com leguminosas, que leva à formação de nódulos nas raízes, onde ocorre a fixação de nitrogênio. O sistema NTR é o responsável por controlar o metabolismo de nitrogênio e induzir a fixação de nitrogênio atmosférico. Este sistema contém dois pares de proteínas regulatórias da família de dois componentes, NtrB-NtrC e NtrY-NtrX. Sabe-se que as proteínas NtrB e NtrY controlam a atividade de NtrC e NtrX respectivamente, mas sua função neste organismo ainda é pouco conhecida. Os genes ntrBC e ntrYX estão presentes em uma única região gênica, cuja organização sugere que formam dois operons, nifR3ntrBC e ntrYX. O objetivo deste trabalho é caracterizar a região promotora dos dois potenciais operons e analisar sua expressão em diferentes fontes de nitrogênio. As regiões promotoras dos genes foram amplificadas e clonadas no vetor pPROBEGT, a montante do gene gfp, cujo produto é a proteína verde fluorescente, que pode ser quantificada através de um leitor de fluorescência. Os plasmídeos resultantes foram transferidos para a estirpe selvagem Rhizobium sp. NGR234 e testados em cinco diferentes fontes de nitrogênio: glutamato, NH4Cl 2 e 20mM, nitrato de sódio e nitrato de amônio. Os resultados mostram que o promotor a montante de nifR3, denominado pBC, tem sua expressão aumentada na presença de nitrato de sódio, parecendo ser esta a condição que melhor induz a expressão desse operon. O promotor a montante de ntrY, pYX, tem nível de expressão mais alta que pBC, mas não parece ter expressão diferenciada nas diversas condições de nitrogênio utilizadas. Novas condições serão testadas para identificar as condições nas quais estes genes são expressos na tentativa de contribuir para a identificação de sua função em NGR234.

Palavras-chave: Fixação de nitrogênio, Rhizobium, Regulação Gênica