RESUMO

O câncer de mama é a principal causa de morte entre as mulheres, sendo um problema de saúde pública mundial. A epigenética estuda as modificações da estrutura tridimensional do DNA, não dentro da sequência, mas na periferia, como a metilação das citosinas e modificações pós-traducionais nas histonas, que interferem na expressão de genes. Por esse motivo, a epigenética pode estar intimamente ligada ao desenvolvimento e ao agravamento de patologias, como o câncer de mama. As metaloproteases de matriz (MMPs) são uma família de endopeptidases conhecidas por estarem envolvidas na progressão do câncer através do aumento da motilidade celular, invasão e metástase linfática. No câncer de mama é muito estudado o eixo de ativação das MMP-2/MMP-14/TIMP. Este projeto propõe a análise da regulação da expressão epigenética do gene da MMP-14 em linhagens tumorais de mama. As linhagens MCF-7, MDA-MB 435 e MDA-MB 231 foram cultivadas e foram extraídos RNA para estudo de expressão e DNA para estudo de metilação. A qualidade da síntese de cDNA foi avaliada por RT-PCR do gene constitutivo GAPDH. A reação de RT-PCR para o gene MMP-14, mostrou que as linhagens MDA-MB 435 e MDA-MB 231 expressam o gene MMP-14, mas a linhagem MCF-7 não expressa. Além disso a linhagem MCF-7 foi cultivada com agente desmetilante 5-asa-2-desoxicitidina e após esse tratamento o gene MMP-14 passou a ser expresso. Estes resultados indicam que a regulação desse gene envolve a metilação do DNA. Para confirmar esses resultados o DNA extraído foi tratado com bissulfito de sódio e a região promotora do gene amplificada, clonada e sequenciada. Os resultados mostraram que as linhagens 435 e 231 apresentaram região promotora do gene pouco metilada, e a MCF-7 apresentou região promotora altamente metilada. Foi observado, portanto, a correlação entre expressão positiva e ausência de metilação do DNA nas linhagens que expressam MMP-14 e o contrário com a linhagem que não expressa o gene. Ficou assim comprovada a teoria da regulação epigenética do gene MMP-14. Os passos seguintes do projeto são analisar demais linhagens tumorais de importância clínica quanto a expressão do MMP-14, e verificar se o gene da metaloprotease em questão é regulado por epigenética em amostras tumorais de mama.

Palavras-chave: Epigenética, Câncer de Mama, MMPs