RESUMO

Herbaspirillum rubrisubalbicans é uma bactéria diazotrófica capaz de colonizar diversas espécies de gramíneas, através de uma associação endofítica geralmente não patogênica; no entanto, pode causar a doença da estria mosqueada em cana-de-açúcar B4362. Schmidt e colaboradores (2012) mostraram que o sistema de secreção do tipo III (SST3) de H. rubrisubalbicans é essencial para a ocorrência da doença, o que levou à sugestão de que uma ou mais proteínas efetoras transportadas pelo SST3 seriam responsáveis por desencadear a doença da estria mosqueada. Durante o sequenciamento do genoma de H. rubrisubalbicans M1, foi identificado um gene (denominado hrpo4) que codifica uma proteína homóloga à proteína AvrPto de Pseudomonas syringae, uma proteína efetora do SST3 responsável pelo desencadeamento de necrose tecidual em cultivares suscetíveis de tomate.Visando avaliar o envolvimento do gene hrpo4 no desenvolvimento da doença da estria mosqueada, foi construída de uma estirpe de H. rubrisubalbicans mutante no gene hrpo4. O mutante foi obtido por simples recombinação usando o plasmídeo pSUP202 contendo um fragmento ?5' e ?3' do gene hrpo4 e o marcador de seleção Tn5 KanR. A patogenicidade do mutante foi avaliada através de ensaios de inoculação em Vignia unguiculata. A estirpe mutante hrpo4não teve redução em sua patogenicidade quando comparada com a estirpe selvagem no organismo avaliado, sugerindo quea proteína Hrpo4 não estaria envolvida no desencadeamento da doença nesta planta. O gene hrpo4 foi amplificado e clonado no vetor pET29a para expressão em Escherichia coli. A proteína superexpressa foi purificada por cromatografia de troca aniônica, e usada em ensaios de inoculação em V. unguiculata. A inoculação de Hrpo4 causou necrose tecidual nesse organismo, sugerindo que essa proteína pode ser uma das responsáveis pelo fenótipo da doença, embora claramente não seja a única responsável. Serão realizados novos testes de interação planta-bactéria a fim de avaliar a contribuição desta proteína para a doença da estria mosqueada.

Palavras-chave: Herbaspirillum rubrisubalbicans, AvrPto, Doença da Estria Mosqueada