RESUMO

Heparina é utilizada em clínica médica desde a década de 50 e, apesar das intensas buscas por novas drogas, é até hoje é o agente antitrombótico de escolha. Sua ação sobre o endotélio vascular foi investigada e observou-se que a heparina, bem como outros agentes antitrombóticos, estimulam de forma específica a síntese do proteoglicano de heparam sulfato (PGHS), e também alteram a estrutura de suas cadeias sacarídicas, promovendo um aumento na proporção do dissacarídeo trissulfatado deste composto. Este PGHS passa a ter uma atividade antitrombótica interessante, o que nos levou a propor que a atividade dos compostos antitrombóticos, pelo menos em parte, pode ser mediada por este proteoglicano. Utilizando células endoteliais em cultura e heparina conjugada com biotina e marcadores fluorescentes, fomos capazes de demonstrar previamente que o sítio de ligação para a heparina é a matriz extracelular (MEC), a qual deve participar de forma indireta no mecanismo de estímulo do PGHS. Assim, os mecanismos envolvidos neste processo são objetos de estudo do presente projeto. Nesta parte do projeto, objetiva-se avaliar os componentes da Matriz Extracelular que estão envolvidos no mecanismo de estímulo da síntese de PGHS pela heparina. Para tanto, foram utilizadas duas heparinas não fracionadas, que foram modificadas quimicamente (dessulfatadas por 4 ou 6 horas, ou ainda, totalmente dessulfatadas (N-e O-sulfato) e carboxireduzidas). A dessulfatação gradual (4 ou 6 horas) foi acompanhada pela redução do estímulo da síntese de PGHS. Já a dessulfatação total (Ne O-dessulfatado) aboliu o estímulo de PGHS. Por outro lado, a carboxiredução também levou a diminuição do estímulo da síntese de PGHS. Assim, considerando que este fenômeno não é apenas fruto da carga negativa (heparina dessulfatada ainda tem carboxila), nem somente de sulfato (heparina carboxirreduzida ainda mantém sulfatos), mas fruto da localização espacial das cargas negativas, as celulas foram expostas à estas heparinas com o intuito de avaliar alterações morfológicas que poderiam ocorrem ou no arranjo dos componentes da matriz extracelular. No entanto, as heparinas, aparentemente, não induzem alterações na morfologia celular das células endoteliais, mesmo quando avaliado em microscopia óptica ou eletrônica de varredura. Além disto, foi possível observar uma sutil, mas não expressiva, alteração na marcação de fibronectina, quando as células foram expostas às heparinas não modificadas. Estudos adicionais devem ser realizados para a comprovação destes dados.

Palavras-chave: Heparina, Célula Endotelial, Matrix Extracelular