RESUMO

As aranhas do gênero Loxosceles são popularmente conhecidas como aranhas-marrons por apresentarem coloração característica que varia de marrom claro a marrom escuro. Dentre o gênero, a espécie L. intermedia tem importância clínica, pois está envolvida em casos de envenenamento humano na região de Curitiba e Região Metropolitana. Sabe-se que o veneno desta aranha é um complexo de substâncias, de maior parte proteica. Dentre elas, destacam-se as fosfolipases-D, por estarem relacionadas com diversos efeitos biológicos sobre hemostasia e resposta inflamatória. Entre esses efeitos, podem causar agregação plaquetária, ativação de células endoteliais, hemólise, aumento da permeabilidade vascular e citotoxicidade. Em uma série de estudos, foram identificadas diversas isoformas de fosfolipase-D do veneno de L. intermedia, das quais seis foram obtidas em sua forma recombinante, sendo nomeadas de LiRecDT1 a LiRecDT6. Além disso, também foi obtida um isoforma mutada da LiRecDT1, por uma mutação sítio-dirigida, que substituiu a histidina na posição 12 do sítio catalítico por uma alanina. Essa isoforma mutante foi chamada de LiRecDT1H12A e demonstrou uma menor atividade fosfolipásica. Outros estudos mostram que, em detrimento da atividade catalítica da LiRecDT1, ocorre a geração de metabólitos lipídicos bioativos. Dentre eles, há o ácido lisofosfatídico (LPA) que pode estar envolvido com eventos de adesão de eritrócitos a células endoteliais. Com base nisso, objetivou-se o estudo do papel da fosfolipase-D recombinante (LiRecDT1) sobre eritrócitos para o acontecimento de citoadesão eritrócito-endotélio. Os eritrócitos foram tratados, separadamente, com a toxina LiRecDT1; com a isoforma mutada da toxina (LiRecDT1H12A); e com veneno total da aranha L. intermedia. Após isso, foram transferidos para o cultivo de células endoteliais (linhagem RAEC) a fim de propiciar a citoadesão. Os resultados foram visualizados em microscopia óptica e, embora preliminares, indicam que eritrócitos expostos a fosfolipase-D recombinante de L. intermedia podem estar sendo induzidos a liberar lipídios bioativos que levam ao evento de citoadesão. No entanto, dificuldades acerca da reprodutibilidade do experimento não permitem maiores investigações. Mas estima-se que o evento pode estar relacionado aos distúrbios hematológicos observados no Loxoscelismo. Com a confirmação destas observações iniciais, o estudo segue a fim de esclarecer os mecanismos envolvidos na citoadesão e verificar seu efeito na ativação das células endoteliais.

Palavras-chave: Aranha-marrom, Fosfolipase-D, Citoadesão