POTENCIAL ANTIMICROBIANO IN VITRO DAS CEPAS DE LACTOBACILLUS REUTERI E LACTOBACILLUS SALIVARIUS DE AVES, FRENTE A MICRORGANISMOS INDICADORES

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Aluno de Iniciação Científica: Flávia Raquel Bender (PIBIC/UFPR-TN)

Curso: Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N)

Orientador: Edna Tereza de Lima

Colaborador: Rubens Sthêfan Castilho dos Santos, Marcelo Gusella e

Departamento: Campus PalotinaAnorita Vendrame

Setor: Campus Palotina

Área de Conhecimento: 20100000


RESUMO

O objetivo do estudo foi avaliar a ação de substâncias antimicrobianas in vitro produzidas por diferentes cepas de Lactobacillus reuteri e L. salivarius (produtoras), frente a microrganismos indicadores Gram positivos e Gram negativos. Foram utilizadas 30 cepas de L. reuteri e 30 de L. salivarius isoladas do inglúvio e cecos de aves matrizes reprodutoras. As cepas foram reativadas em caldo MRS, incubadas a 37°C por 48 horas em condições de anareobiose (109 UFC/mL). A capacidade inibitória das cepas das 60 cepas de Lactobacillus testadas frente aos diferentes microrganismos indicadores: Enterococcus faecalis, Lactobacillus casei, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus sake, Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus, Salmonella Enteretidis fagotipo 4 e Pseudomonas spp, foi observada pela formação do halo de inibição ao redor das culturas produtoras e dos sobrenadantes livres de células (microfiltração – Millex GV), utilizando os métodos de antagonismo "spot on the lawn" e antagonismo simultâneo de difusão em poços. As culturas indicadoras foram reativadas em caldo BHI a 37°C por 24 horas (106 UFC/mL). Foi verificado por meio do halo de inibição que os microrganismos indicadores, E. faecalis, L. monocytogenes, L. casei, L. helveticus, L. sake e S. Enteretidis apresentaram maior percentual de sensibilidade (100%) pelo método de antagonismo "spot on the lawn", com diâmetro variando de 12 a 26mm, enquanto o S. aureus (96,67%), Pseudomonas (90%) apresentaram o menor índice, diâmetro entre 09 a 25mm. Este método foi de grande importância para verificar a ação de diversas substâncias antimicrobianas (ácidos orgânicos, peroxido de hidrogênio, bacteriófagos e bacteriocinas) produzidas pelas cepas de L. reuteri e L. salivarius. A atividade antimicrobiana dos sobrenadantes livres de células foi observada pelo método de antagonismo simultâneo de difusão em poços, com formação do halo de inibição ao redor dos poços. Neste método, L. monocytogenes, Pseudomonas e S. aureus, L. helveticus e L. sake apresentaram percentual de sensibilidade de 73,33%, 20%, 13,33%, 62% e 45,55% respectivamente, com diâmetro variando entre 07 a 29 (mm). Enquanto E. faecalis, L. casei e S. Enteretidis apresentaram um perfil de resistência frente as cepas produtoras. Utilizando os métodos de antagonismo "spot on the lawn" e antagonismo simultâneo de difusão em poços, verificamos que as cepas produtoras apresentaram ação antagônica frente aos microrganismos Gram positivos e Gram negativos, com possível ação de substâncias protéicas denominadas de bacteriocinas.

Palavras-chave: Lactobacillus spp, Aves, Substâncias Antimicrobianas