RESUMO

Durante o desenvolvimento do sistema nervoso, os neurônios devem fazer contato correto com alvos específicos que normalmente estão muito afastados. Para isso são necessárias vias sinalizadoras que funcionam como guias no correto direcionamento do cone de crescimento do axônio. As semaforinas (SEMAs) são proteínas que podem ser secretadas ou associadas à membrana que têm papel ativo na sinalização para uma correta na navegação axonal durante o desenvolvimento do sistema nervoso (ramificação e formação de sinapses) atuando como inibidores ou quimiorepelentes e realizando atividade quimioatrativa, além da participação na progressão tumoral, angiogênese e diferenciação de linfócitos B. As semaforinas de classe 5 são proteínas transmembrânicas, que contém sete repetições trombospondinas. Dois membros dessa família foram identificados em vertebrados, Sema5A e Sema5B. A Sema_5A é ainda pouco estudada e pouco se sabe sobre sua modulação e papéis específicos. Através do estudo da interação entre proteínas, é possível esclarecer melhor os processos no qual determinada proteína participa num organismo vivo. Desta forma, o objetivo deste trabalho é construir uma isca para o domínio citoplasmático da Sema_5A através de fragmentos de cDNA (DNA complementar) contendo a seqüência codificadora do domínio citoplasmático de Sema_5A, que foram amplificados por PCR, digeridos e inseridos no vetor pGILDA Estas construções foram transformadas em bactérias DH5? e as colônias que apresentavam o inserto, observados através de PCR de colônia foram amplificados e submetidos a técnica de Mini-prep. Esta isca será utilizada para a técnica de duplo híbrido, amplamente utilizada para detectar interações protéicas in vivo e será de grande importância para o desenvolvimento de projetos futuros para identificar os parceiros moleculares da Sema_5A.

Palavras-chave: Semaforinas, Neurobiologia, Biologia Molecular